AAV病毒载体生产和纯化
AAV基因治疗商业化制造解决方案
人们对基因治疗越来越感兴趣，这就更需要提供一个更具成本效益和可扩展性的病毒载体制造平台来开发该治疗方案。腺相关病毒已经成为可选择的载体，因为它具有显著的安全性，感染该载体不会致病。此外，AAV不能自行复制，也不能直接整合到宿主基因组中。
Thermo Fisher Scientific 提供 创新型产品和服务，旨在通过AAV载体开发加速基因治疗项目。凭借覆盖整个AAV生产流程的解决方案，我们的目标是提供卓越的产品和专业知识，帮助企业开发突破性疗法。
AV工作流程
监管AAV载体的开发有多种策略，但一般步骤包括质粒开发和生产、细胞扩增、质粒转染、病毒载体生产、纯化以及填充 和完成。在贴壁或悬浮细胞系中产生AAV的瞬时转染策略在临床前和早期发育阶段最为常见。AAV生产的另一种选择是开发稳定的生产细胞系，这有助于确保病毒载体的长期稳定供应。
使用哺乳动物细胞系进行生产，例如HEK293细胞， 需要用转染试剂将多个质粒转染到细胞中。当 Sf9 细胞用于生产时，目的基因通过杆状病毒表达载体系统引入。这两种选择都需要中等规模到大规模的质粒生产。
质粒开发和生产
工作流程的第一步是产生大量质粒 DNA，然后将其转染到宿主细胞中用于AAV生产。 细菌表达后，从发酵培养物中收获并纯化质粒 DNA。为供临床使用，需进行安全性测试，从而帮助确保质粒 DNA 不含任何与工艺或产品相关的杂质。
细胞扩增、质粒转染和病毒载体生产
在进行转染之前，选择并扩增合适的哺乳动物或昆虫细胞系。在大规模生产中，可以悬浮生长的细胞，如悬浮适应的HEK293或Sf9昆虫细胞，比贴壁细胞具有优势，因为它们更容易扩展。尽管如此，贴壁HEK293培养系统很容易建立，并经常用于工艺开发阶段或较容易扩展的工艺。
一旦细胞扩增，目的基因被引入，病毒载体生产就开始了。无论采用何种生产规模或细胞系统，我们都能为您的上游AAV生产流程提供最先进的产品。
核酸纯化
经过若干天生产，AAV载体已准备好收获和纯化。在满足所有法规要求后，产品就可以进行最终填充、包装和完成了。
下游加工可能是一个费力且昂贵的过程，因此开发有效且可扩展产生高纯度和高产率的AAV颗粒的方法至关重要。
对于大规模生产而言，从上游工艺中产生的各种工艺和产品相关杂质中分离病毒载体且符合cGMP标准的纯化技术至关重要。亲和色谱在单一步骤中具有高纯度和高收率的特点，可以减少AAV纯化过程步骤，从而提高收率并减少工艺制备时间。
需要抛光色谱步骤来富集完整的衣壳。空粒子和满粒子之间的等电点 (pI) 只有微小的差异。希望用高分辨率树脂进行离子交换层析，以确保空衣壳和完整衣壳的分离。
POROS CaptureSelect AAV 亲和树脂，专为纯化不同 AAV 血清亚型而设计，为行业提供一个可扩展的平台。此外，高分辨率POROS树脂能够提供出色的抛光解决方案。
色谱树脂
- AAV亲和层析树脂
- 阴离子交换色谱树脂
- 阳离子交换色谱树脂
- 疏水相互作用色谱树脂
填充和完成
最终产品经过纯化，成功通过污染物和杂质测试，并获得临床使用监管批准后，就可以进行配制、最终填充和完成。赛默飞世尔有能力提供药品填充、完成、储存和交付服务。如果客户喜欢独立进行填充和完成，我们提供一系列用于治疗的无菌容器系统，包括生物处理容器和包装袋。我们提供适合您独特AAV应用和工作流程的解决方案。